Tornando-se com a comuna de Schizophyllum: crie uma cultura estéril a partir de cogumelos encontrados: 3 etapas (com fotos)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Última modificação: 2024-01-30 11:39

Este manual tem como objetivo explicar como criar uma cultura estéril do cogumelo Schizophyllum Commune (nome comum cogumelo Split Gill) em uma placa de Petri usando cogumelos encontrados. Schizophyllum Commune tem mais de 28.000 sexos, pode ser encontrado em todos os continentes, exceto na Antártica, e tem a capacidade (como outros "fungos de podridão branca e marrom") de degradar a poluição endócrina (plásticos, hormônios que imitam produtos petroquímicos industriais como o fertilizante Atrazina, o plastificante Bisfenol-A ou o hormônio sintético Dietilestilbestrol).

Abordarei as técnicas de identificação de cogumelos selvagens, como fazer uma placa de Petri com ágar nutriente e como usar os cogumelos encontrados para cultivar uma cultura isolada estéril em sua placa de Petri. Outros instrutíveis nesta série abordam técnicas como a identificação genética de cogumelos, ensaios enzimáticos simples para testar a capacidade do cogumelo de quebrar plásticos e imitar a poluição hormonal e como fazer queijo com S. Commune.

Este projeto surgiu do trabalho colaborativo de Mary Maggic, Paula Pin e eu durante uma residência no HANGAR em Barcelona, Espanha, no outono de setembro de 2018. Para mais informações sobre o projeto, leia em ~~ ou pule todo o Bla Bla e vá direto para a Etapa 1 para o tutorial:)

As imagens são do Schizophyllum Commune Fanzine ~. Os arquivos podem ser baixados gratuitamente aqui

Durante a residência, nossos três objetivos principais eram:

1 ~ Pesquisar e digerir a literatura científica sobre Schizophyllum Commune e suas várias interações com hormônios e poluentes petroquímicos desreguladores endócrinos. S. Commune é um dos muitos fungos de "podridão branca e marrom" com a capacidade de quebrar a poluição hormonal e endócrina. Esses fungos se alimentam de árvores excretando enzimas "lignocelulósicas" de seus corpos em rede ou "micélios" e as enzimas são capazes de quebrar a celulose e a lignina das quais as árvores são feitas. Devido às semelhanças estruturais entre celulose, lignina e EDS '/ hormônios como Atrazina, BPA, Estradiol, Dietilestilbestrol e Nonilfenóis, as enzimas "lignocelulósicas" secretadas pelos fungos também podem quebrar uma ampla variedade de tóxicos. Além disso, S. Commune produz polissacarídeos imunoestimulantes que são úteis como preventivos e tratamentos de câncer (aprovado no Japão para o tratamento de câncer cervical), pode aumentar as propriedades fitoestrogênicas de certas plantas por meio da fermentação, pode ser usado no lugar de coalho e lactobacílio em processos de fabricação de queijos e produção de enzimas de dissolução de coágulos de trombina (úteis no tratamento de trombose). Estranhamente, esses mesmos "beta-glucanos" que podem ser extraídos com água fervente como tratamentos de câncer e imunoestimulantes, também são usados pela indústria do petróleo para aumentar a produção de óleo, amarrando S. Commune em um ciclo de feedback bizaar à produção de desreguladores endócrinos petroquímicos, é capaz de degradar e remediar.

2 ~ Desenvolva protocolos DIY e DIWO (faça com outros) que simplifiquem essas receitas para trabalhar com EDCs e fungos para traduzir o conhecimento científico codificado em uma linguagem que seja mais acessível. Use essas receitas para a educação, para o questionamento, para a resistência às colonizações moleculares e para criar novas narrativas sobre os devires de multiespécies e nossa mutagênese coletiva.

3 ~ Desafie o discurso dominante cisheteronormativo e queerfóbico em torno dos desreguladores endócrinos (EDC). Para citar a bolsa de estudos de Malin Ah-King e Eva Hayward sobre essas questões, "Muitos meios de comunicação estão relatando esses contos endócrinos assustadores de nossos quintais. Em um esforço para trazer à tona essas questões - como descreveremos a seguir - a mídia gerou uma metamorfose de Frankenstein que ameaça o sexo e a sexualidade. Em vez de abordar os muitos outros riscos à saúde associados à exposição a tóxicos, as questões mais sensacionais e polêmicas são debatidas e críticas. Isso levanta questões: por que o sexo é mais importante do que o câncer, doenças autoimunes, e até a morte? Que nervos culturais (muitos dos quais são globalizados), são acionados? E, para aquelas de nós com preocupações feministas, como reorientamos o debate para longe do essencialismo, sexismo e heteronormatividade? " (Sexos Tóxicos).

Schizophyllum Commune é um "fungo da podridão branca" único, visto que tem mais de 28.000 sexos genéticos. Essa adaptação, teorizam muitos, possibilitou a incrível diversidade genética dessa espécie, que existe em todos os continentes do mundo, exceto na Antártica. Queríamos celebrar a bela multiplicidade sexual deste organismo como um exemplo da estranheza da biologia. O discurso dominante em torno de EDCs na mídia, e até mesmo de ativistas ambientais, concentra-se fortemente em narrativas não científicas, de que essas moléculas causam certas sexualidades ou gêneros que nossa sociedade patologiza, rotula como não normativos e muitas vezes busca eliminar ou evitar. Não é apenas o pânico sexual, o foco queer fóbico do clamor público sobre o EDC cientificamente irrealista (hormônios e desreguladores endócrinos não tornam as pessoas queer ou trans), mas está ignorando todos os efeitos devastadoramente reais que podemos associar aos EDC: obesidade, distúrbios da tireóide, certos tipos de câncer, entre outros riscos à saúde.

Etapa 1: Encontre Schizophyllum Commune que mora em sua comunidade

Culturas estéreis de laboratório de Schizophyllum Commune podem ser adquiridas por cerca de US $ 350 em um banco de cultura microbiológica como o ATCC … razão pela qual optamos por cultivar cogumelos selvagens gratuitamente:)

Foi fácil porque eu estava lendo sobre a Schizophyllum Commune e um dia percebi que ela crescia em uma árvore em frente ao meu apartamento. Se você não tiver a sorte de tropeçar acidentalmente em S. Commune em sua vizinhança, você vai querer ir a uma área arborizada para procurar cogumelos "braquetes" que crescem em árvores de madeira dura doentias (árvores que parecem não estar crescendo muito bem) ou árvores caídas. S. Commune é um dos fungos mais comuns existentes em todo o mundo e pode ser encontrado basicamente em qualquer lugar onde haja madeira dura para crescer.

Mushroomobserver.org fornece uma excelente descrição detalhada de onde e quando você provavelmente encontrará S. Commune, bem como como identificá-lo e como evitar "se parecem" que podem levar a erros de identificação:

IDENTIFICAÇÃO: Schizophyllum commune é facilmente identificada por suas guelras fendidas, cabelo denso e chapéu em forma de leque. O chapéu tem 1-4,5 cm de largura e geralmente uma forma de concha ou leque com uma superfície cinza a esbranquiçada. Os basidiósporos têm 5-7,5 × 2 -3 micrômetros Um cogumelo semelhante conhecido como “Crimped Gill” Plicaturopsis crispa não é tão amplamente distribuído.

HABITAT: Schizophyllum commune cresce em madeira dura usando enzimas para degradar a lignina e causa "podridão branca". Portanto, é encontrado na maioria das áreas lenhosas. Ele pode ser encontrado durante todo o ano devido à sua capacidade de secar, reidratar em melhores condições e continuar a esporular.

Esse fungo pode ser parasita de árvores de pequeno diâmetro que estão sob estresse de outros fatores, como a seca.

PARECE: Plicaturopsis crispa ou “Crimped Gill” é semelhante ao Split Gill. Ele também tem um corpo de frutificação em forma de concha / leque. No entanto, a tampa é marrom-avermelhada ou marrom-amarelada, e a parte de baixo é muito distinta. Tem veias onduladas como brânquias que são muito diferentes das brânquias fendidas da comuna de Schizophyllum. O Crimped Gill é menos comum, mas distinto quando encontrado."

Etapa 2: Faça placas de ágar de nutrientes para que S. Commune cresça

Para isolar uma cultura do S. Commune, você descobriu que precisará de algumas placas de Petri cheias de comida para o cogumelo. O Agar de extrato de malte é um alimento simples para o S. Commune, ou "meio nutriente" que pode ser feito com ingredientes facilmente acessíveis. Também é uma boa fonte de alimento para usar ao fazer experimentos de ensaio enzimático com S. Commune e outros fungos de podridão branca ou marrom ~ ~ este processo será abordado em outro instrutível.

NOTA LATERAL: Se você teve problemas para encontrar S. Commune, existem muitos outros fungos na mesma família que podem ser cultivados usando os mesmos processos e são tão bons, se não melhores, na degradação de poluentes desreguladores endócrinos. O rabo de peru (Trametes Versicolor) foi encontrado em muitos estudos que observaram centenas de fungos de podridão branca e marrom como os maiores produtores de enzimas "lignocelulósicas" que degradam a poluição petroquímica. Os cogumelos ostra também são muito bons nisso.

Eu faço meu trabalho microbiológico em um laboratório comunitário de biologia chamado BUGSS (Baltimore Underground Science Space), onde tenho acesso a vidrarias, balanças digitais, cilindros graduados, uma autoclave (para esterilização por calor e pressão da mídia), etc. Laboratórios como este têm surgiu em todo o mundo na última década, então você pode querer verificar esta lista para ver se há algum perto de você. Se você não tiver um ótimo laboratório comunitário como este em sua área, terá que investir em alguns equipamentos básicos para este processo, como:

1 ~ Uma escala digital para medir seus ingredientes com precisão

2 ~ Uma panela de pressão para esterilizar sua mídia com calor e vapor

3 ~ Placas de Petri, podem ser compradas online bem barato, vidro reutilizável ou plástico descartável funcionam, mas reutilizável é sempre melhor:)

4 ~ Algumas vidrarias para misturar os ingredientes, esterilizar e armazenar.

Se você não quiser investir nesse equipamento, pode encontrar placas de ágar de extrato de malte pré-derramado para comprar em sites como a Amazon - só será mais caro no longo prazo se você planeja continuar a fazer o trabalho microbiológico.

Já existem muitos guias excelentes e vídeos do youtube sobre como fazer suas próprias placas de petri de mídia de nutrientes em casa. Portanto, em vez de entrar em muitos detalhes sobre isso, vou apenas vincular a alguns - e fornecer a receita para Agar de extrato de malte a 2%, que é o meio nutriente que você usará.

Freshcap Musrooms: guia sobre como fazer placas de ágar para cultivo de cogumelos em casa

Mykoweb: Introdução ao cultivo de cogumelos

Folha de Dados Técnicos do Agar Extrato de Malte

Agar de extrato de malte a 2% (MEA) ~~ Receita para 1 litro:

Extrato de malte de 20g (suprimento comum para a fabricação de cerveja, pode ser comprado online)

Agar 15g (agente de solidificação - é usado para cozinhar com frequência, então pode ser comprado online ou em alguns supermercados)

1 litro de H20 (eu geralmente uso água de osmose reversa, que pode ser comprada na maioria dos supermercados em jarras de galão)

Esta receita pode ser facilmente modificada se você quiser fazer quantidades menores. Costumo fazer apenas 250 mL por vez, por exemplo, então acabo usando apenas 5 gramas de extrato de malte, 3,75 gramas de ágar e 250 mL de água.

Etapa 3: inocule sua placa de Petri com fungos

O cogumelo que você vê é chamado de “corpo de frutificação”, é apenas uma pequena parte do organismo. A maior parte do seu corpo está escondido na árvore (ou no solo), consumindo a madeira. Esta parte do cogumelo é chamada de micélio. Para cultivar o corpo filamentoso, tentacular, rizomático e micelial branco do Schizophyllum Commune em uma placa de Petri, você tomará uma amostra do caule, esterilizará e colocará em suas placas MEA. O micélio crescerá a partir da amostra esterilizada do caule do cogumelo e colonizará a placa de Petri, parecendo um tapete branco felpudo.

Você precisará:

• As placas de Agar de Extrato de Malte (MEA) que você preparou na etapa anterior
• Álcool isopropílico 70% (álcool isopropílico) e um borrifador
• Toalhas de papel
• Bisturi ou apenas uma navalha de aço inoxidável - o cortador de caixa funcionará
• pinças de metal
• luvas
• Uma chama - Eu uso uma lâmpada alcohaul para esterilização de instrumentais, a NonDisjunction tem um ótimo tutorial de como fazer uma aqui.
• Superfície estéril para cortar (acabei de usar uma placa de Petri estéril para isso)
• Parafilme, um filme de parafina usado para selar placas de Petri - você também pode usar fita adesiva se não tiver isso

TÉCNICA ESTÉRIL:

A principal coisa que você deve ter em mente ao tentar usar uma técnica estéril é que bactérias e esporos estão continuamente caindo no ar, então você deseja manter suas placas de Petri cobertas o máximo possível. Quando você levanta as tampas para derramar mídia ou inocular, é sempre melhor segurar a tampa logo acima do prato, permitindo que você acesse o interior horizontalmente, mas mantendo a tampa acima do prato para evitar que bactérias entrem. Em segundo lugar, você são um conglomerado gigante de humanos, bactérias, fungos e outros organismos ~~ embora você não possa ver, você está cercado por uma densa nuvem de micróbios que estão se espalhando para fora de seu corpo. Em vez de ficar apenas sentado na superfície da pele, seu micro-bioma se estende no ar ~~ tãããão, nunca balance suas mãos sobre a placa de Petri ou se incline sobre a placa aberta para olhar. E use luvas se você os tem;)

CONFIGURE SEU ESPAÇO DE TRABALHO SEMI-ESTÉRIL

Escolha uma superfície de trabalho não porosa, livre de detritos e lixo. Pulverize a área com sua solução de álcool isopropílico 70% e limpe-a com uma toalha de papel. Coloque sua chama no centro de sua área de trabalho e acenda-a. Você vai querer trabalhar o mais próximo possível da chama porque ela cria um pequeno campo estéril ao redor dela. Coloque as placas MEA de um lado e a amostra de cogumelo em uma superfície de corte estéril do outro lado. Eu normalmente uso uma placa de Petri esterilizada como superfície de corte esterilizada e também como descanso para ferramentas. Despeje um pouco de álcool isopropílico em um copo pequeno - você usará para esterilizar sua lâmina e pinça enquanto trabalha.

* ¡~ INOCULAR ~! *

Antes de fazer qualquer coisa, esterilize a lâmina e a pinça mergulhando-as no alquil isopropílico e depois segurando-as um pouco sobre a chama. Após a esterilização, coloque-os sobre a superfície de corte esterilizada, caso os tenha pousado. Usando a pinça, segure o caule do cogumelo e corte um pedaço da ponta. Pegue este pedaço e corte todos os lados de modo que você termine com um pequeno cubo de miolo de cogumelo com todas as superfícies externas removidas. Isso ajuda a se livrar de todos os outros micróbios que vivem no cogumelo para que não contaminem sua cultura. Em seguida, mergulhe o núcleo do caule no isopropil por cerca de 30 segundos, retire e deixe secar dentro do campo estéril da chama (não use a chama para secar, isso matará o cogumelo). Esterilize novamente a pinça com a chama, enquanto espera que o núcleo do caule seque. Em seguida, basta levantar a tampa de uma das placas MEA apenas o suficiente para deslizar a pinça pela lateral e usar a pinça esterilizada para colocar o núcleo da haste no centro da placa. Sele a placa com parafilme e, nas próximas semanas, você verá o micélio comunitário colonizando a placa.

Normalmente faço várias placas ao trabalhar com amostras selvagens, de modo que, se houver contaminação, é mais provável que tenha pelo menos uma cultura limpa.